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科研血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。景源實驗技術(shù)介紹一下在科研血清實驗中常見的一些問題。

1、如何貯存和凍結(jié)血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但有必要注意的是，融解過程中有必要規(guī)矩地搖晃均勻。長時刻貯存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而構(gòu)成沉積或可見的混濁。因而，推薦在-20℃以下貯存血清，并防止反復(fù)凍融。主張血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，主張無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

2、血清中包含絮狀沉積，它們是什么，怎樣處理?

這些沉積包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除掉沉積，離心血清(400g，1-2分鐘)或許簡單的讓其沉積在瓶子底部，將血清小心地轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不主張選用過濾的辦法除掉沉積，由于沉積會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉積并加熱至37℃就會再溶解。所以，運用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃，沉積會天然消失。

3、如何防止血清中發(fā)作沉積?

按如下操作可防止沉積的發(fā)作：

(1)凍結(jié)血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，削減沉積的發(fā)作。

(2)血清分裝凍存時，須規(guī)矩搖晃均勻(當心勿形成氣泡)，使溫度與成分均一。

(3)勿直接由-20℃直接至37℃凍結(jié)，因溫度改變太大，簡單形成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)作沉積。

(4)勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得污濁，一起血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因而受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。

(5)若有必要做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時刻過久或搖晃不均勻，都會形成沉積物的增多。

在ELISA實驗的過程中，血清培養(yǎng)是很重要的步驟，但是在這過程中也會出現(xiàn)一些的問題，比如說，在培養(yǎng)進程中會出現(xiàn)一個個“小黑點"的現(xiàn)象，這是怎樣一回事呢？接下來就為大家解析一下這個現(xiàn)象出現(xiàn)的原因以及解決方法。

我們一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中有黑點，我們先不要著急，也不要慌張，要搞清楚這個黑點是什么?什么構(gòu)成的?首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀況，黑點是否游動等。如果細胞被污染，微生物則會不斷繁衍，培養(yǎng)基就會敏捷變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞，生長狀況出色，與黑點出現(xiàn)前比較，沒有任何改變，那么，黑點的出現(xiàn)或許與以下幾種狀況有關(guān)：

第一，細胞生長過老，黑點是破碎的細胞殘骸

第二，血清質(zhì)量欠好，重復(fù)凍融的效果

第三，制作培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細胞生長

第四，制作培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格(可應(yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點)

第五，培養(yǎng)的原代細胞中出現(xiàn)小黑點(或許是原代組織中的雜質(zhì)，屢次傳代能夠消除)。

那么我們怎樣防止黑點生成呢？一般要做到以下幾點：

(1)盡可能減少血清凍融次數(shù)。

(2)培養(yǎng)基無需37℃水浴。

(3)培養(yǎng)基保持PH值7.0- 7.2。

(4)嚴格控制制作培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定時沖刷。

(5)掌握細胞傳代的機會，細胞切勿生長過老。